技術(shù)概述
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法， 是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果在裂解液中加入偶爾蛋白X的抗體，用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。
目前常用prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，protein A 能與抗體特異性結(jié)合，若細(xì)胞中存在與誘餌蛋白X相結(jié)合的目的蛋白, 就可以形成蛋白復(fù)合物“目的蛋白+誘餌蛋白X+抗誘餌蛋白抗體+ProteinG或A”。再通過Western blot檢測免疫沉淀物。
這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
技術(shù)詳情
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