技術(shù)概述
昆蟲細胞表達系統(tǒng)是四大表達系統(tǒng)（昆蟲細胞、細菌、酵母、哺乳動物細胞表達系統(tǒng)）之一。昆蟲細胞表達系統(tǒng)原理是通過轉(zhuǎn)座作用將轉(zhuǎn)移載體中的表達組件定點轉(zhuǎn)座到能在大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體（Bacmid）上，通過抗性和藍白斑篩選到重組穿梭質(zhì)粒，提取穿梭質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染昆蟲細胞后得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清浸染昆蟲細胞，獲得表達的重組蛋白。
桿狀病毒是一類閉合環(huán)狀雙鏈病毒，病毒粒子呈桿狀，以昆蟲為主要宿主。桿狀病毒還是一種出芽型分泌性病毒粒子，在感染細胞后能迅速在培養(yǎng)細胞中水平傳播而保持細胞在相當長的時間內(nèi)不裂解，從而最大限度地保持了外源蛋白的穩(wěn)定，昆蟲細胞表達系統(tǒng)又被稱為昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)。
目前研究較多的是苜蓿銀紋夜蛾核多角體 (AcNPV) ，其宿主是草地貪夜蛾。而sf9細胞，正是桿狀病毒表達系統(tǒng)的宿主細胞之一。sf9細胞屬于半貼壁型細胞系，可以進行懸浮培養(yǎng)，也可以進行貼壁培養(yǎng)，在應(yīng)用于蛋白的表達與制備純化中，有著許多的優(yōu)點。
1、與其他真核表達系統(tǒng)相比，外源基因表達水平高，特別是細胞內(nèi)蛋白。多數(shù)情況下，表達的重組蛋白可溶，折疊正確有翻譯后修飾（如糖基化等），有生物學(xué)活性，容易分離純化；
2、昆蟲細胞懸浮生長，容易放大培養(yǎng)，有利于大規(guī)模表達重組蛋白；
3、易于表達異源多聚體蛋白，可通過多種重組病毒同時感染昆蟲細胞或用含有多個表達框的一種病毒感染昆蟲細胞來實現(xiàn)；
4、安全性。昆蟲桿狀病毒不感染脊椎動物。
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